血液中乙醇含量的測(cè)定—頂空氣相色譜法
自2011年5月1日醉駕入刑以來,人們?cè)絹碓街匾暰坪篑{駛行為。此外,酒類飲料的主要成分是乙醇,大量飲用高濃度酒可能會(huì)造成酒精中毒甚至是死亡,過量飲酒同時(shí)也會(huì)使行為異常,從而發(fā)生意外甚至犯罪,比如酒后鬧事、醉酒死亡等。因此,在發(fā)生某些自殺、兇殺的案件時(shí),執(zhí)法部門也要首先確定是否有酒精作用因素,所以從這方面來看,測(cè)定血液中乙醇的含量也有著至關(guān)重大的意義。
儀器和耗材
1、儀器
GC-17氣相色譜儀(帶氫火焰離子化檢測(cè)器),分流/不分流毛細(xì)管進(jìn)樣口
AHS-32型全自動(dòng)頂空進(jìn)樣器
專用毛細(xì)管色譜柱PEG-20M:30m×0.32mm×0.5um
氣源:PAH-300氫氣發(fā)生器,PXA-2000空氣發(fā)生器,PXN-300氮?dú)獍l(fā)生器
N2000色譜工作站
電腦、打印機(jī)
2 、試劑
乙醇、叔丁醇均為色譜純?cè)噭?,血液中乙醇?biāo)準(zhǔn)樣品,樣品提取與前處理
1) 樣品前處理
本次方法驗(yàn)證參考GA/T842—2019《血液酒精含量的檢驗(yàn)方法》的要求。分別移取100μL血液中乙醇樣品,加入20mL頂空瓶中,然后加入500μL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液,作頂空進(jìn)樣分析。將頂空瓶及裝有血液中乙醇標(biāo)準(zhǔn)樣品的采血管放入AP 500樣品架中,使用AP 500全自動(dòng)樣品處理工作站,由工作站全自動(dòng)完成采血管的抓取與轉(zhuǎn)移,采血管信息的掃碼錄入,血樣混勻,采血管開蓋與關(guān)蓋,血液樣品的抽取與精準(zhǔn)分推,頂空瓶的抓取與轉(zhuǎn)移,頂空瓶的開蓋與鉗蓋密封,頂空瓶?jī)?nèi)樣品添加與稀釋操作。
2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
分別移取100μL系列濃度乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(5、10、20、50、80、200、300 mg/100 mL),加入20 mL頂空瓶中,然后均加入500 μL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液,每個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)溶液獨(dú)立重復(fù)測(cè)定2次。
3) 樣品分析
氣相色譜條件
色譜條件:柱溫:50℃;檢測(cè)器:火焰離子化檢測(cè)器;檢測(cè)器溫度:200℃;進(jìn)樣口溫度:250℃。頂空自動(dòng)進(jìn)樣器,頂空爐溫:65℃;取樣針溫度:90℃;傳輸線溫度:110℃;樣品瓶加熱平衡時(shí)間10 min。
回收率與精密度
取同一空白血樣,分別添加乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液,使血液中乙醇的質(zhì)量濃度分別為120mg / 100mL,平行6份,乙醇平均加標(biāo)回收率為101%,RSD為1.35。
結(jié)果與討論
本次方法驗(yàn)證滿足GA/T 842—2019《血液酒精含量的檢驗(yàn)方法》的要求。
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