質(zhì)譜分析儀在微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域中的分析優(yōu)勢(shì)
質(zhì)譜分析儀是一種測(cè)量離子質(zhì)荷比(質(zhì)量-電荷比)的分析方法,其基本原理是使試樣中各組分在離子源中發(fā)生電離,生成不同荷質(zhì)比的帶電荷的離子,經(jīng)加速電場(chǎng)的作用,形成離子束,進(jìn)入質(zhì)量分析器。
傳統(tǒng)的致病微生物檢測(cè)大多采用微生物培養(yǎng)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的方法檢測(cè),不僅分析周期長(zhǎng)而且沒有明確的種群分型標(biāo)準(zhǔn),往往造成分析結(jié)果的滯后和種類分型的誤判。
據(jù)估計(jì),在臨床實(shí)驗(yàn)室中僅在鏈球菌的分類中,就有高達(dá)13%的辨別錯(cuò)誤。近年來,質(zhì)譜技術(shù)在微生物檢驗(yàn)方面的應(yīng)用越來越多,這主要得益于其得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì):
(1)可用于多種微生物樣本,如痰液、血液、尿液、腦脊液和胸腹腔積液以及經(jīng)過培養(yǎng)的樣本;
(2)可用于幾乎所有類型的病原體鑒定和分類檢測(cè),如細(xì)菌、真菌及其孢子、病du、寄生蟲等;
(3)可對(duì)病原的多種成分進(jìn)行分析,包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、脂多糖、脂寡糖、DNA、多肽及其他可被離子化的分子;
(4)檢測(cè)速度快,例如一個(gè)病原微生物的質(zhì)譜檢定實(shí)驗(yàn),包括樣本的采集和制備,整個(gè)過程不到10 min;
(5)樣本用量少;
(6)樣本前處理簡(jiǎn)單;
(7)特異性和準(zhǔn)確性高,例如金黃色葡萄球菌的表型鑒定,Rajakaruna等利用基質(zhì)輔助激光解吸/電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)技術(shù)分析了來自臨床實(shí)驗(yàn)室的95個(gè)分離群和39個(gè)葡萄球菌群,并利用MicrobeLynx軟件成功的識(shí)別了各個(gè)種群;
(8)高敏感性,例如液相串聯(lián)質(zhì)譜可以檢測(cè)到10~100個(gè)細(xì)菌或20~50個(gè)孢子的存在。在對(duì)生物樣本進(jìn)行處理后,甚至可以在單個(gè)菌水平發(fā)現(xiàn)并確定致病菌,使其在微生物尤其是傳染病病原體鑒定方面具有巨大的優(yōu)勢(shì)。近年來已建立了微生物胞膜蛋白質(zhì)、脂多糖、核酸等的指紋數(shù)據(jù)庫,使其檢測(cè)更加準(zhǔn)確和快速。
目前在細(xì)菌檢測(cè)中應(yīng)用較多是飛行質(zhì)譜技術(shù)。通過檢測(cè)細(xì)菌胞膜成分或表達(dá)的特異蛋白對(duì)細(xì)菌進(jìn)行種群的鑒別,不僅可以識(shí)別病原菌,而且有助于發(fā)現(xiàn)新的病原菌。此外還有用于病原體的藥物敏感性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)和真菌檢測(cè)研究等。
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