高效液相色譜儀由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)等五大部分組成（圖1）。分析前，選擇適當(dāng)?shù)纳V柱和流動(dòng)相，開(kāi)泵，沖洗柱子，待柱子達(dá)到平衡而且基線平直后，用微量注射器把樣品注入進(jìn)樣口，流動(dòng)相把試樣帶入色譜柱進(jìn)行分離，分離后的組分依次流入檢測(cè)器的流通池，最后和洗脫液一起排入流出物收集器。當(dāng)有樣品組分流過(guò)流通池時(shí)，檢測(cè)器把組分濃度轉(zhuǎn)變成電信號(hào)，經(jīng)過(guò)放大，用記錄器記錄下來(lái)就得到色譜圖。色譜圖是定性、定量和評(píng)價(jià)柱效高低的依據(jù)。但操作液相色譜儀時(shí)謹(jǐn)記以下注意事項(xiàng)。

1、排氣泡

　　如何排出聚四氟乙烯管道內(nèi)氣泡：

　　排空操作：打開(kāi)LC-20AT泵排空閥（逆時(shí)針90度以上），按Purge鍵，泵開(kāi)始排

　　空運(yùn)行。檢查流動(dòng)相入口聚四氟乙烯管路沒(méi)有氣泡后，Purge燈不再閃爍時(shí)，關(guān)閉LC-20AT泵排空閥。

　　如何排出進(jìn)樣針內(nèi)氣泡：

　　使用手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣時(shí)，在進(jìn)樣前和進(jìn)樣后都需用多次清洗進(jìn)樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進(jìn)樣前必須用樣品液潤(rùn)洗進(jìn)樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡（進(jìn)樣針吸取樣品之后，顛倒針管，氣泡會(huì)往上跑，猛推一些樣品出去，氣泡即可隨之排出）。

2、流動(dòng)相：

　　流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水，酸堿液及緩沖液需經(jīng) 0.22μm 膜過(guò)濾后使用，過(guò)濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和有機(jī)相膜的使用范圍； 使用泵時(shí)，A、B 兩相中，則 A管道連接藍(lán)蓋瓶的水相，B 管道連接藍(lán)蓋瓶的有機(jī)相。確保每天用重新超聲和超濾過(guò)的水和有機(jī)相。

3、色譜柱：

　　使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說(shuō)明書(shū)，注意適用范圍，如 pH 值、流動(dòng)相類(lèi)型等；

　　使用符合要求的流動(dòng)相；

　　使用保護(hù)柱；

　　如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5%甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。

　　色譜柱在不使用時(shí)，根據(jù)柱子特性和使用要求，用不同溶劑封存。比如，PAH專(zhuān)用柱用乙腈沖洗封柱，取下后緊密封閉兩端保存；不要高壓沖洗柱子；一般用流速 1.0ml/min 沖洗，壓力約 7Mpa。

4、樣品：

　　進(jìn)樣之前必須用 0.22μm 濾膜過(guò)濾，確保樣品中不含固體顆粒；

　　一般盡量用流動(dòng)相制備樣品液。比如測(cè) PAHs 時(shí)，流動(dòng)相用的是水和已腈，進(jìn)樣的溶劑也應(yīng)為水或已腈。

　　手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量一般大于 40μl，并且不要含氣泡，針頭外壁要擦凈。

5、壓力

　　操作過(guò)程若發(fā)現(xiàn)壓力很小，（一般是在 6-20）則可能管件連接有漏，注意檢查。當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)誤警告（各組件指示燈均為紅色），一般為漏液，其中一個(gè)感應(yīng)器中已有溶劑，漏液故障排除后，擦干，點(diǎn)擊On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再點(diǎn)擊操作界面中的 Instrument/System On 即可。

　　操作過(guò)程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高，則可能管路已堵，應(yīng)先卸下色譜柱，然后用分段排除法檢查，確定何處堵塞后解決。若是保護(hù)柱或色譜柱堵塞，可用小流量流動(dòng)相或以小流量異丙醇沖洗，還可采用小流量反沖的辦法（新柱不提倡），若還是無(wú)法通暢，則需換柱；運(yùn)行過(guò)程中自動(dòng)停泵，可能為壓力超過(guò)上限或流動(dòng)相用完；

6、切記關(guān)燈

　　超過(guò)2小時(shí)以上不做實(shí)驗(yàn)時(shí)，從工作站將檢測(cè)器燈關(guān)掉（燈的壽命有限）。

7、使用登記：

　　使用者須認(rèn)真履行液相色譜儀使用登記制度，出現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)報(bào)告，不要擅自拆卸儀器。